親和色譜填料結(jié)構(gòu)

更新時間：2021-12-10 點擊次數(shù)：2679

親和層析是根據(jù)一種生物分子間的特異相互作用來分離物質(zhì)的層析方法，利用待分離物質(zhì)與配體間所具有的特異性親和力來達(dá)到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。

親和色譜填料由基體、配體和間隔臂三部分組成。

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基體

基體是有一定粒度、一定剛性、多孔的表面有大量可反應(yīng)基團(tuán)的固體物質(zhì)，用于支撐間隔臂和配體，在其表面通過反應(yīng)鍵合上間隔臂和配體后制得親和色譜填料。基體有兩類：一類是有機(jī)聚合物，如纖維素、交聯(lián)葡聚糖、交聯(lián)瓊脂糖等；第二類是多孔玻璃和硅膠。

基體應(yīng)具備的條件：

1.基體是不溶性支持物，具有三維的多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，有足夠大的排阻極限，大分子能不受阻礙地進(jìn)出內(nèi)孔。

2.基體顆粒應(yīng)該是均勻的球形并具剛性，粒度均勻，孔徑分布范圍小，機(jī)械性能好。

3.基體必須是親水性及惰性的，其骨架與蛋白質(zhì)或其他重要生化物質(zhì)的作用必須極弱，以降低非特異性吸附。

4.基體理化性質(zhì)穩(wěn)定，不會被制備填料時的試劑和流動相破壞。

5.基體必須具有大量表面活性基團(tuán)。

配體

配體是接到基體或間隔臂上與蛋白質(zhì)分子發(fā)生作用的部分，配體的選擇是親和色譜的關(guān)鍵。配體有兩類：一類叫特異性配體，只對一種蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力；另一類叫組特異性配體，也叫通用性配體，對某一類蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力。

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配體應(yīng)具備的條件：

	配體與待分離的生物分子有特異性結(jié)合。
	配體既要能有效地與生物分子結(jié)合，親和力相當(dāng)，又能有效地與所吸附的生物分子解離。
	配體既有能特異性地與待純化的蛋白質(zhì)分子相結(jié)合的活性點，又有與基體或間隔臂相偶聯(lián)的化學(xué)基團(tuán)。
	配體自身應(yīng)具有良好的穩(wěn)定性，能耐受偶聯(lián)以及洗脫時的溫度變化和化學(xué)環(huán)境，制得的填料可以多次重復(fù)使用。